6.  漂洗  将700μl的溶液W2加入吸附柱Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。

 

7.  再漂洗  将500μl的溶液W2加入Spin Column中，12000rpm离心30-60秒，弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟，除去残留乙醇。

8.  洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上，在吸附柱膜和树脂的处加入30-100μl的水或TE Buffer，室温静置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱DNA，可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。

    注意：Elution Buffer 组成为1 mM EDTA和2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应。把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率，如果提取的质粒>10kb，请将洗脱液预热至65℃，并适当延长洗脱时间。

 

 

注意事项：

1.请尽量采用浓度1.0～1.5%的琼脂糖凝胶。（胶浓度过大粉碎不彻底，太小，溶胶漏掉）

2.琼脂糖凝胶要求新配制、刚刚跑过电泳的。电泳缓冲液，也要求新配制的。

3.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。

4.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

 

 

DNA浓度和纯度检测

   OD260值为1，相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。

   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8，如果洗脱时不使用缓冲液，而使用去离子水，由于受PH值和离子浓度的影响，比值会偏低。