使用方法:
加液1、8ml滴瓶包装(少量试验首选)
滴瓶垂直滴加每滴50ul,每孔各一滴。
2、 100ml、500ml或更大包装。
根据需要等量混合,每孔100ul。注意混合马上使用
温育:上述加液后,根据个人试验需要,可温育5-30分钟
终止:加等体积的1N的HCl或者2N的H2SO4来终止反应。酶标孔中反应液从蓝色变为黄色。
读数:终止反应后,30分钟内在450nm处读数
不加终止液可以在620-650nm处读数 |
|
注意:
降低底物强度:如果出现高的反应背景和/或沉淀,表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀,可以在加入终止液后马上读数;另外,可以进一步稀释一抗和/或HRP结合物。为了降低非特异性背景颜色,推荐进一步降低一抗和/或HRP结合物的浓度,尽量避免降低底物浓度。动力学检测:TMB单组分底物在与过氧化物酶反应时产生一种蓝色,可以在加底物后620-650nm处读数,不需终止反应 |