2. 试剂含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水和生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
3.试验中需要异丙醇和乙醇,请提前准备RNase-free的异丙醇和乙醇。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液RW1 和溶液RPE中加入无水乙醇,并做好标记;溶液使用后,避免长期暴露于空气中,用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
2.约200μl 骨髓细胞加入400μl Buffer RS 在离心管中混匀。温和充分震荡几次。
*Buffer RS 占的比例越大,RNA稳定。大于4倍时,可以4℃保存12个
月.一般情况可以-20—-80℃长期保存。
3.加入400ul溶液RR,颠倒混匀。
* 禁止使用蜗旋器,防止基因组断裂混入。4℃条件下离心。
4. 大于12000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心
5. 取上清至1.5 ml离心管中,加入0.6体积的异丙醇(或加入1体积无水乙醇),混合均匀。此步提取几百个碱基的小片段RNA是必须的。
步骤6-10可选择硅胶膜离心柱吸附法(较为纯净)或直接离心沉淀法(相对前者提取量较多)
A. 硅胶膜离心柱吸附法(较为纯净)
6A. 将制备管置于2 ml (试剂盒内提供) 离心管中,转移步骤5中的混合液到制备管中,6,000×g离心1min(如果液体较多可以分两次转移和离心)。
* 4℃条件下离心。
7A. 弃滤液,将制备管弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer RW1,12,000×g离心1 min。
* 确认在BufferRW1 中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,在制备管中加入700 μl Buffer RPE,12,000×g离心1 min;以同样的方法再用700 μl Buffer RPE洗涤一次。
* 确认在BufferRPE中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
9A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。
10A. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中,在制备管膜中央加30-100 μl RNase-free Water(加入液体越少,浓度越大) 。室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA
B. 直接离心沉淀法(相对前者提取量较多)
6B. 大于12000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心
7A. 弃滤液,离心管中加入700 μl Buffer RW1,悬浮沉淀,12,000×g离心5 min。
* 确认在Buffer RW1中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8A. 弃滤液,离心管中加入700 μl Buffer RPE,悬浮沉淀12,000×g离心5 min。
* 确认在Buffer RPE中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
9A. 尽弃滤液,室温干燥去除乙醇。
10A.加入10-100 μl RNase-free Water,溶解沉淀,即得RNA
RNA定量及纯度检测
总RNA 的定量和定性分析: 所有标本均经紫外分光光度仪检测所提取总RNA 的浓度及纯度,ODA260/ODA280 的值为1.7~ 2.0。
EZ-RNA-B3
骨髓细胞总RNA小量快提试剂盒
试剂盒内容 |
50次
Cat:RN325 |
250次
Cat: RN326 |
Miniprep column |
50 |
50×5 |
2 ml microfuge tube |
50 |
50×5 |
溶液RS Solution RS |
25 ml |
25ml×5 |
溶液RR Buffer RR |
25 ml |
25 ml×5 |
溶液RW1 Buffer RW1 |
15 ml |
15 ml×5 |
溶液RPE Buffer RPE |
15 ml |
15 ml×5 |
RNase-free Water |
10 ml |
10 ml×3 |
说明书 Protocol |
1 |
1 |
贮存条件:
室温,有效期2年。