※  Galaxybio 公司研发的活化HRP，对优质辣根过氧化物酶次序偶联，再活化，使辣根酶富含活性基团。一经活化的HRP，极易和含氨基NH2的小分子或蛋白氨基NH2的共价结合。因此使用本方法标记物，具有标记率高、活性好、本底低及非常敏感等特点。敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。A型液体包装，标记抗体的量比较随意，ng或ug级均可以。特别适合科研用的昂贵抗体的标记。也适合抗体抗原活性的检测。

※  一步标记，简便快速。与待记抗原或抗体混合后（约12个小时过夜标记或37℃0.5小时。）

※  可以微量标记，节省昂贵的抗原抗体。

※  无需透析，即时使用；

※  标记率极高，可大于95%；敏感性一般是传统过碘酸法标记3~5倍。

※  本试剂盒针对氨基进行标记，故只对含有氨基的分子。可以进行抗原或其他蛋白的标记。小分子的标记，如瘦肉精、DNA、多肽等等，标记时，如要提高HRP的利用率，可以加入过量的小分子，然后透析除去游离的小分子；如果要即时使用，参考蛋白抗原的标记，减少小分子的用量，从而减少游离的小分子。

※  本底远远低于其它方法。

●注意事项：

1. 抗原抗体如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，也可以超滤离心管进行超滤；微量的含NH2 的小分子，会严重影响标记率。

2. 反应体系一般100μl～500ul /100ulHRP(相当于1mgHRP)。体系太小，可能发生自身交联，造成本地升高；体系太大会影响标记率。

3. REAGENT Ⅲ 终止液，封闭残余活化基团。

4. 注意反应 pH值约维持在9.5左右。pH值太低，多加反应启动剂。

5. 后续试验中，可采用本公司酶联稀释液，标准反应时间30分钟。当本底高时，以较高浓度蛋白溶液封闭的酶标板，同时把酶标稀释液的蛋白浓度加大。如果问题依旧存在，请联系我们技术咨询。

6 本试剂仅用于科学研究；

附带缓冲液清单：

由于蛋白分子量，氨基酸种类有所不同，标记效果也有差别。如何寻找抗原抗体的最佳标记比例？

1.      取几个离心管，每管加入上述重悬的活化HRP 5ul，分别加入不同体积的抗体溶液，比方1ul、2ul、4ul、8ul、16、32ulul，然后各加入启动剂5ul，最后以水补充同一体积。37℃反应半小时。

2.      通过ELISA方法检测抗体稀释度最大的管，即为最佳标比例。

A型和B型活化HRP比较