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      首页产品分类目录分子生物免疫诊断→PROTEINA蛋白A金黄葡萄球菌蛋白A

      PROTEINA蛋白A金黄葡萄球菌蛋白A

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产品简介

金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal Protein A、简称SPA)

SPA是细胞壁抗原的主要成分,几乎90%以上的菌株均含有这种成分,但不同的菌株含量差别十分悬殊。SPA占整个细胞壁蛋白成分的6.7%,通过胞壁肽聚糖以共价键与之结合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。

该的重组金黄色葡萄球菌蛋白A是大肠杆菌生产的基因工程产品,具有极高Fc段结合活性,性能稳定,易于纯化等优点。 重组蛋白A还可与多种报告分子(荧光染料、酶标记、生物素、胶体金、放射性标记等)偶联并不影响其与抗体结合的活性。这些偶联反应可用于组织化学、Western杂交、ELISA试验等的抗体检测。另外,重组蛋白A还可固定于固体支持物上用于单克隆抗体或多克隆抗体的纯化。

SPA的免疫学性质(1. Protein AProtein G的相对结合强度)

金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)能与人及多种哺乳动物血清IgG分子中的Fc片段结合,结合的亲和性次序依次是猪、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛;对大白鼠、绵羊的亲和力差;对马、犊牛、山羊等无亲和力;对所有的鱼类、两栖类、爬行类、鸟类(除少数例外)均不能与之结合。鸡的IgG必须与相应的抗原形成复合物才能与SPA结合,原因可能是Ag-Ab复合物改变了IgG的Fc片段的构象。SPA与IgG结合的亚类主要是IgG1、IgG2和IgG4。 SPA除与IgG结合外,还能与血清中少量的IgM和IgA结合,SPA菌对各类免疫球蛋白的吸附率:IgG为90%~98%,IgM为2%~30%,IgA为1.5%~20%。 出现共沉反应的SPA与IgG必须有两个结合部位,它们分别在Fc和Fab段上,缺一虽能与SPA结合,但不出现共沉反应,这种Fab的参与并非SPA-抗体反应。现已研究表明,IgG与SPA的结合部位是CH2和CH3的交界处。

SPA的理化性质

SPA是一种蛋白质,由亮、缬、脯、丙、苏、甘、丝、谷丙、天门冬及赖氨酸等十种氨基酸组成。由于不含有胱氨酸及半胱氨酸,所以无二硫键。紫外光谱和吸收系数为A275nm %=1.65,等电点为pH5.1。SPA十分稳定,用4mol/L尿素、硫氰盐酸、6mol/L的盐酸胍和pH2.5的酸性条件,以及加热煮沸均不影响其活性。其分子量因测定方法不同而有所差异

SPA的生物学特性

1.免疫原性与过敏原性 SPA做为免疫原能刺激免疫活性细胞合成Ig,又能与其相应抗体的Fab段结合呈现抗原抗体的特异性反应。SPA-IgG注射家兔皮下可引起Arthus样反应,还可引起豚鼠的迟发性超敏反应。SPA体外试验,能刺激豚鼠离体回肠收缩。

2.抗吞噬作用 由于IgG的Fc段结合点既是lgG调理活性结合点,又是SPA反应点。因此,SPA可与吞噬细胞竞争,结果抑制了多形核白细胞的吞噬作用,也可能是SPA阻断调理素与吞噬细胞作用的结果。

3.固定补体 SPA-IgG和免疫复合物一样可以固定人和某些动物(如豚鼠、猪、狗等)血清中的补体,主要是通过补体传统激活途径。

4.促有丝分裂因子 SPA是一种B细胞激活剂,固相SPA作用明显,并不需要T细胞辅助,可容性SPA作用微弱,必须有T细胞参与。

5.去封闭作用 固相SPA能部分去除肿瘤病人和带瘤动物血清中的封闭活性,从而降低了血清对淋巴细胞介导的细胞毒的封闭作用。

SPA的应用

SPA应用很广,但所有应用的原理都离不开SPA具有与IgG的Fc段的结合能力,主要应用方面如下:

1.SPA菌的协同凝集作用

用已知的标准血清,吸附到SPA菌的表面,使之成为吸附抗体的载体,再以此去诊断相应的未知抗原而产生肉眼可见的凝集颗粒,诊断的抗原可以是颗粒性的,也可以是可溶性的。此种凝集相当于反向间接血凝,但省去间接血凝中的抗体纯化,红血球鞣化等复杂手续,而只需要 SPA菌体及粗制免疫血清即可。所以此法简单、快速,特异性敏感性均较满意。目前已用于许多细胞和病毒的检测及分型。协同凝集只适用于检测抗原,未见应用于检测抗体的报道。

2.作为广谱第二抗体 用SPA代替抗体IgG的第二抗体,有如下优点:①SPA制备容易,性质稳定,易纯化,对人和多种哺乳动物的IgG都能应用,不受种属限制。而第二抗体的制备比较麻烦,且需多次免疫动物,在应用上要受同种属的限制;②SPA的结合力强,相当于游离抗体与抗原的结合力,对人和兔的亲和常数均为103 L/克分子,结合后对IgG的活性无影响。无论在0℃、37℃、44℃及56℃几乎均能立即结合而无需长时间的孵育,因此可以缩短试验时间,第二抗体在较长的孵育中,出现抗原分解的问题也可以得到解决;③SPA容易标上125 I、荧光素、辣根过氧化物酶、铁蛋白等,因此可与多种技术相结合;④在检查细胞上的病毒抗原时,第二抗体往往特异性不强,会非特异性地与细胞膜上的Fc受体结合。SPA分子高度均一,它不是免疫球蛋白,不受Fc受体影响,所以有较高的抗IgG特异性;⑤用第二抗体做免疫沉淀试验时,必须将抗免疫球蛋白的浓度调整至等价,才能产生最佳的沉淀作用。而用SPA菌沉淀,不受此限制,能保证彻底的沉淀;⑥SPA与lgG结合是可逆的,用4mol/L尿素、4mol/L硫氰酸、盐酸(pH2.5)或鸟嘌呤盐酸盐等都可以使之重新解离。

3.用于提取纯化IgG 利用SPA与IgG的结合特性提取IgG,比常规采用硫酸铵、Sephadex柱,DEAE柱或免疫梯度离心等法要简便得多,而且纯度好。

4.检测和提纯IgM IgM在病毒的早期诊断中具有重要意义,为了检测特异性IgM抗体,必须首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的办法,利用此法也为IgM的提纯开辟了道路。

5.其它方面 用于免疫复合物的检测、体外激活补体功能试验、细胞表面标记以及肿瘤表面抗原的检测等。

 

1. Protein AProtein G的相对结合强度

++++ =强结合,++ =中等结合,- =弱或不结

 

物种物种

亚类亚类

protein A

protein G

 

 

结合结合

结合结合

lgA

可变

-

 

lgD

-

-

 

lgD

-

-

 

lgG1

++++

++++

 

lgG2

++++

++++

 

lgG3

-

++++

 

lgG4

++++

++++

 

lgM

可变

-

鸡蛋黄

lgY

-

-

 

++

++++

 

++

+

山羊

 

-

++

豚鼠

lgG1

+++

++

 

lgG2

+++

++

仓鼠

 

+

++

 

++

++++

考拉

 

-

+

骆驼

 

-

+

猴(恒河)

 

++++

++++

小鼠

lgG1

+

++++

 

lgG2a

++++

++++

 

lgG2b

+++

+++

 

lgG3

++

+++

 

lgM

可变

-

 

+++

+++

 

++++

+++

大鼠

lgG1

-

+

 

lgG2a

-

++++

 

lgG2b

-

++

 

lgG3

-

++

绵羊

 

+/-

++

 

 

 

Staphylococcal Protein A

————重组金黄色葡萄球菌A蛋白

 

 

 

 

  货号

  产品名称

规格

备注

Cat:SA4001

重组金黄色葡萄球菌A蛋白

1mg

磷酸盐缓冲液,冻干粉,

Cat:SA4001

10mg

Cat:SA4001

100mg

 

贮存条件:

低温运输,4℃或-20℃贮存,有效期3年。

生产日期:见包装

 

 

 

 

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